آزمون HPLC شناسایی پلی‌سوربات ۸۰ (Tween 80)

شناسایی پلی‌سوربات ۸۰ با HPLC یکی از روش‌های استاندارد در کنترل کیفی محصولات دارویی و بیولوژیک است. این آزمون به دلیل حساسیت بالا، تکرارپذیری مناسب و امکان مشاهده الگوی کروماتوگرافیک خاص این ماده، در بسیاری از فارماکوپه‌ها به عنوان یک روش معتبر معرفی شده است.

در این آزمون، پلی‌سوربات ۸۰—که مخلوط پیچیده‌ای از استرهای پلی‌اکسی‌اتیلنی و اسیدهای چرب (عمدتاً اولئیک اسید) است—یک پروفایل کروماتوگرافیک مشخص ایجاد می‌کند. مقایسه این پروفایل با استاندارد مرجع، مبنای اصلی شناسایی است.

در صورتی که نیاز به انجام این تست دارید با من تماس بگیرید و یا مستقیما درخواست تست خود را از طریق فرم پذیرش با شرکت آرک زیست آزما ارسال کنید.

اصول و منطق روش

پلی‌سوربات ۸۰ یک ترکیب کاملاً خالص و تک‌پیکی نیست، بلکه مجموعه‌ای از مولکول‌های با وزن مولکولی و میزان اتوکسیلاسیون متفاوت است. همین ویژگی باعث می‌شود در ستون معکوس (RP) چندین پیک با الگوی مشخص ایجاد کند.

هدف آزمون شناسایی این است که:

• زمان بازداری پیک‌ها
• الگوی کلی پروفایل
• نسبت نسبی پیک‌های مشخص

بین نمونه و استاندارد همخوانی قابل قبولی داشته باشد.

این روش یک آزمون کیفی است و هدف آن اثبات حضور پلی‌سوربات ۸۰ است، نه اندازه‌گیری مقدار دقیق آن.

روش و تکنیک کلی کار

در این آزمون:

1. استاندارد مرجع Polysorbate 80 در حلال مناسب حل می‌شود.
2. نمونه فرآورده نیز با همان حلال آماده‌سازی می‌گردد.
3. هر دو محلول تحت شرایط یکسان وارد سیستم HPLC می‌شوند.
4. کروماتوگرام استاندارد الگوی مرجع را نشان می‌دهد.
5. کروماتوگرام نمونه با استاندارد مقایسه می‌شود.

در صورتی که:

• پروفایل پیک‌ها
• شکل کلی الگو
• محل تقریبی پیک‌ها

با استاندارد مطابقت داشته باشد، آزمون مثبت تلقی می‌شود.

مزایا و ارزش‌های این روش

۱. اختصاصیت بالا

به دلیل پیچیدگی ساختار پلی‌سوربات ۸۰، الگوی HPLC آن بسیار ویژگی‌دار است و با بسیاری از سورفکتانت‌های دیگر اشتباه نمی‌شود. این نکته باعث می‌شود آزمون برای شناسایی بسیار قابل اعتماد باشد.

۲. امکان تشخیص تفاوت‌های کیفی

گاهی تفاوت در منبع، کیفیت یا فرآیند تولید Tween 80 باعث تغییر در نسبت پیک‌ها می‌شود. HPLC این تفاوت‌ها را به خوبی نشان می‌دهد.

۳. قابل استفاده در حضور سایر مواد فرمولاسیون

حتی در محصولات بیولوژیک پیچیده (مانند mAb، IVIG، HSA)، با آماده‌سازی صحیح نمونه می‌توان پروفایل Tween 80 را مشاهده کرد.

۴. سرعت و تکرارپذیری خوب

روش‌های RP-HPLC معمولاً سریع بوده و قابلیت روتین شدن در QC را دارند.

نکته بسیار مهم

پلی‌سوربات ۸۰ از نظر کروماتوگرافی یک ماده چرب، غیرفرار، چسبنده و دیر شستشو است. اگر رعایت نشود، می‌تواند به‌مرور باعث:

• آلودگی ستون
• افزایش فشار
• پهن شدن پیک‌ها
• تغییر زمان بازداری
• کاهش عمر ستون

شود.

برای جلوگیری از این مشکلات در صورتی که متخصص HPLC در آزمایشگاه خود ندارید، انجام این تست توصیه نمیشود و پیشنهاد میشود این تست را برون سپاری کنید.

جمع‌بندی

آزمون HPLC برای شناسایی پلی‌سوربات ۸۰ روشی قدرتمند، اختصاصی و دقیق است که به‌ویژه در کنترل کیفی محصولات بیولوژیک اهمیت بالایی دارد.
الگوی چندپیکی حاصل از ساختار پیچیده این ماده، یک “امضای کروماتوگرافیک” قابل اعتماد ایجاد می‌کند.

با این‌حال چون پلی‌سوربات‌ها تمایل زیادی به چسبندگی و باقی‌ماندن روی سطح ستون دارند، رعایت اصول شستشو، انتخاب ستون مناسب و مدیریت صحیح دستگاه، برای حفظ دقت آزمون و جلوگیری از تخریب ستون کاملاً ضروری است.